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中瑞祥解析活性氧測定儀的使用步驟
瀏覽次數(shù):246發(fā)布日期:2025-06-13

?中瑞祥解析活性氧測定儀的使用步驟

 

活性氧測定儀 使用原理?主要基于熒光探針 DCFH-DA 2',7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯)的氧化反應(yīng)。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH2',7'-二氯二氫熒光素)。DCFH不能通透細(xì)胞膜,從而被細(xì)胞內(nèi)的活性氧(ROS)氧化生成有綠色熒光的DCF(二氯熒光素)。DCF的熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)ROS的水平成正比,因此可以通過檢測DCF的熒光強(qiáng)度來定量測定細(xì)胞內(nèi)的ROS水平?

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活性氧測定儀的使用步驟

?裝載探針?:對于刺激時間較短的細(xì)胞(通常為2小時內(nèi)),先裝載探針后再進(jìn)行刺激;對于刺激時間較長的細(xì)胞(通常為6小時以上),先進(jìn)行刺激后再裝載探針。

?細(xì)胞準(zhǔn)備?:檢測前一天進(jìn)行細(xì)胞鋪板,確保檢測時細(xì)胞數(shù)量小于5×10^5/mL

?藥物誘導(dǎo)?:去除細(xì)胞培養(yǎng)液,加入無血清培養(yǎng)基稀釋的藥物處理,于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育,實(shí)際誘導(dǎo)時間由藥物特性和細(xì)胞類型決定。

?陽性對照?:可選步驟,先用無血清培養(yǎng)基稀釋陽性對照(如Rosup)到常用工作濃度,加入細(xì)胞中孵育30分鐘至4小時,以提高活性氧水平。

?探針裝載?:吸除處理藥物,加入稀釋好的DCFH-DA工作液,37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育30分鐘。

?細(xì)胞清洗?:用無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞1-2次,以去除未進(jìn)入細(xì)胞的DCFH-DA。

?熒光檢測?:使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀等設(shè)備,在激發(fā)波長502 nm、發(fā)射波長530 nm附近檢測DCF的熒光強(qiáng)度?

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活性氧測定儀的應(yīng)用領(lǐng)域和重要性

活性氧(ROS)在細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡等生理和病理過程中起著重要作用。通過測定細(xì)胞內(nèi)的ROS水平,可以了解細(xì)胞在不同條件下的氧化應(yīng)激狀態(tài),對于研究疾病機(jī)制、藥物毒性評估以及開發(fā)新的治療方法具有重要意義。此外,活性氧測定儀還廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、環(huán)境監(jiān)測和食品安全等領(lǐng)域?


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